大規模生產外泌體的自動色譜分離系統Connecting qEV10/qEV100 Gen 2 Columns To Automated Chromatography Systems
-
工業化生產外泌體(Exosome)最佳流程
-
每批次 300 - 1000 mL ; 4 - 5 L 的細胞上清液(Cell Culture Medium)製造處理
-
qEV+自動色譜系統的初步設定與注意事項
大規模生產外泌體的關鍵: qEV 外泌體尺寸排阻色譜分離管柱與自動色譜系統連結說明
在近年中, 由於細胞外囊泡/胞外體 (Extracellular vesicles, EVs)的子分類 -- 外泌體(Exosome)在機制探討與治療潛力的興趣日益濃厚, 要從幾十或上百公升的生物性樣本來源中使用尺寸排阻色譜管柱分離出高純度的EVs就成為了需求。
在 qEV column (SEC) 外泌體尺寸排阻色譜分離管柱中有各種進樣體積的設計, 其中最適合用在大規模生產外泌體的自動色譜分離系統為"qEV10"和"qEV100"兩種型號; 分別從濃縮的細胞上清液(Cell Culture Medium, CCM)中得到高純度的外泌體粒子:
|
濃縮前的CCM上清液體積 |
濃縮後的CCM上清液體積 |
濃縮倍率 |
qEV的選擇 |
使用的濃縮裝置 |
|
300 - 1000 mL |
10 mL |
30 x - 100 x |
qEV10 |
100 kDa TFF 切向流裝置 + 離心過濾濃縮管 |
|
4 - 5 L |
100 mL |
40 x - 50 x |
qEV100 |
將 qEV 管柱接在自動色譜系統上, 可以利用UV(紫外光)色譜來指引最佳分餾的選擇, 在此我們提供了一些設定qEV10和qEV100管柱在自動色譜系統上的說明。
免責聲明: 此說明只提供導引與qEV10 / qEV100相似管柱的特定數值; qEV目前有多種型號的新管柱但並還沒有完全將qEV10 / qEV100實施於自動色譜系統上, 因此雖然此說明內的訊息和特定數值旨在提供高度相關且有效使用qEV管柱的起始步驟, 重要的是qEV管柱並未在這些條件下完整測試過, 使用者/管理者必需要開發自行的獨立方案或是與我們聯繫。
在工業生產外泌體時, 往往需要將細胞上清液進行濃縮來達到每年上千公升的生產目標, 每個月需要有上百公升的產能。
在此我們也提供客製化的尺寸排阻色譜管柱生產, 並與qEV ZENCO自動色譜系統連接。
|
qEV10/35nm (35-400 nm) |
qEV100/35nm (35-400 nm) |
|
|
|
qEV10/35nm通過10 mL人類血漿的典型洗脫曲線(elution profile) |
qEV100/35nm通過100 mL人類血漿的典型洗脫曲線(elution profile) |
qEV ZENCO 自動色譜系統 |
|
各種樣本的複合性、種類、前處理的步驟與體積都會有所不同, 使用者需要定義所要的餾份之洗脫曲線, 使用UV色譜可以指引所要選擇的最佳餾份。
|
選擇要點 |
qEV10 |
qEV100 |
|
濃縮後的樣本進樣體積 (Sample loading volume) |
10 mL |
100 mL |
|
樣本流速 (Sample flow rate) |
推薦以4 mL/min為起始點 |
推薦以8-10 mL/min為起始點 |
|
增加流速: 減少運作時間、針對低黏度的樣本(low viscosity) |
||
|
與其他系統的相容性 |
依照其系統流速和壓力調節的容量而定 |
|
|
使用壓力調節模式 |
推薦使用壓力調節模式, 在通過高黏度、大體積的樣本和重覆使用管柱時會發生壓力尖峰(pressure spikes)的情況 |
|
|
未使用壓力調節的管柱壓力 |
|
| qEV10 | qEV100 |
 |
 |
|
儘管在後續運行中沒有觀察到洗脫曲線發生明顯變化, 仍應於流速調整後將壓力降低以避免出現"壓力尖峰"; 由於這些尖峰訊號對於管柱使用壽命的影響仍是未知, 所以需要記錄下來並利用設定並辨識其樣本適合的壓力上限值來試圖消除尖峰出現的情況。 |
|
|
建議起始壓力上限值: 3 psi |
建議起始壓力上限值: 5-7 psi |
|
管柱的清洗方案: 按照qEV10的使用說明書進行 |
管柱的清洗方案: 按照qEV100的使用說明書進行 |
|
管柱的使用次數: 依照樣本的複合度、所需要的外泌體純度和產率而定 注意: 在連結qEV管柱與自動色譜系統之前, 要徹底清潔相關的線路以避免之後在管柱裡出現氣泡。 |
|
