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關於 Automatic Cell Counter (自動細胞計數儀)

Automatic Cell Counter

自動細胞計數儀

細胞計數 (cell counting) 在大多數的生物實驗中是一個基礎的步驟; 為了要減少會有下游結果的變異出現和錯誤, 將細胞濃度的測定做標準化就會是必要的方式。
近年來, 自動細胞計數儀因其沒有手動操作的血細胞計數板(Hemocytometer)的缺點而變得非常普遍, 然而自動細胞計數儀(Automatic cell counter)還是有難以克服的缺點, 大部分以影像為技術基底的自動細胞計數儀會捕捉影像後藉由軟體成像的技術來提供分析結果, 其中一個典型會出現的問題就是在計算塊狀的(clumpy)細胞時可能會有非常明顯錯誤的計算結果

 

驗證方法

NanoEntek 原廠的 EVE PLUS 自動細胞計數儀就是用以克服以上所遇到的問題, 其使用最先進的光學技術並結合先進獨家的影像分析演算程式來避免出現誤差
使用 EVE PLUS 自動細胞計數儀做塊狀的細胞計數(clumped cell counting)結果的比較如表1。
準備8個貼壁細胞系和2個懸浮細胞系, 使用 EVE PLUS 來測定其密度; 在貼壁細胞系中有4個是屬於"團聚"(Aggregate)的類型。
細胞核染色的細胞計數的線性測試
如果您是使用手動的方法來比較計數的線性結果將會出現很大的誤差和變異而不適合, 所以應該使用更準確的自動化計數方法來比較, 例如細胞核的細胞計數PI dye染色方式 (NanoEntek ADAM-MC2 cell counter)。
為了要確認在細胞核PI dye染色計數與 EVE PLUS的Trypan blue染色計數之間的線性關係, 要先準備高濃度的細胞並進行序列稀釋, 在此選擇使用一個單細胞株 (single cell, Jurkat cell) 和一個塊狀細胞株 (clumped cell, SCC 2.2 cell) 來做比較

 

使用 ADAM-MC2 cell counter進行細胞核PI dye染色細胞計數

NanoEntek 所發佈的 ADAM-MC2 是另一款自動細胞計數儀, 其基於使用 Propidium Iodide (PI) 螢光染劑以染色哺乳類動物細胞。PI 是一個普遍的紅色螢光核與染色體複染劑, 由於其不能滲透到活細胞中, PI 染劑也會廣泛用於偵測死細胞數量。
為了得到正確的計數結果, ADAM-MC2 提供了兩種染色方法: AccuStain Solution T 包含 PI dye + Lysis 裂解液=可用來得到總細胞計數; AccuStain Solution N 則包含 PI dye + PBS=可用來得到非活性的細胞計數。

結果

細胞核染色計數儀的線性測試結果

使用單一的序列稀釋處理兩個高濃度不同型態的細胞來比較 EVE PLUS 和 ADAM-MC2 (細胞核染色計數儀)的線性測試結果。
在每個細胞型態的測試中, 其得到的測量值與線性細胞密度的 R2 值都有非常高度的密切相關性

這證明了 EVE PLUS 可提供非常準確的單細胞和團聚細胞的計數結果。

 

與其他細胞計數儀比較細胞計數結果

在比較了 EVE PLUS 和其他品牌的細胞計數測試表現時, 我們以 使用PI dye的ADAM-MC2 測試的結果為標準; 細胞的濃度已經處理成客戶主要使用的範圍內, 十種細胞被依照類型區分成兩個群體。
依照結果來看, EVE
 PLUS的表現是最接近細胞核PI dye染色細胞計數的結果, 在所有的細胞中也有最低的 CV 值, 非常優異。

結論

EVE PLUS 自動細胞計數儀表現最優異的原因為:

  • 與細胞核染色PI dye細胞計數的結果最相近

  • 對於塊狀的細胞(clumped cell)計數結果是最佳選擇

  • 與其他品牌相比的結果最精準

  • 選擇手動聚焦操作時只需要1秒就可完成分析

  • 選擇自動聚焦操作時可保證結果的重複性

  • 在大部分的細胞系中都可得到最正確的結果

  • 通過高端獨家的演算法得到低 CV 值的分析結果

  • 相對實惠的一次性耗材

  • 內部可自動存檔500筆資料

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