全新發售 qEV Gen 2 , 最優秀的SEC column     Exoid (TRPS) 奈米粒徑/濃度/Zeta Potential 分析儀試樣活動進行中     新品上線: DSC-400 Single Cell Suspension Dissociator 獨家上市     Peak Spectrophotometer 全類型桌上型分光光度計符合您所有的紫外可見光譜需求

最新ISEV國際標準解析

MISEV 最新國際標準解析 (TSEV台灣胞外體學會教育推廣組)

qEV Columns (SEC)

IZON 胞外體提取管柱

 

AFC-V2 (Automatic Fraction Collector)

IZON 胞外體自動提取機

 

Exoid Nanoparticle Analyzer (TRPS)

IZON 奈米粒子(粒徑/濃度/Zeta potential)分析儀

 

qEV Concentration Kit

IZON qEV 胞外體濃縮試劑盒

 

qEV RNA Extraction Kit

IZON qEV 胞外體-RNA萃取試劑組

 

Mobi UV/Vis Microplate Spectrophotometer

MicroDigital 連續式全波長微量盤光譜儀

 

Nabi UV/Vis Nano Spectrophotometer

MicroDigital 連續式全波長超微量光譜儀

 

Lumi Single Tube Luminometer

MicroDigital 單管冷光儀

 

M1324R High-Speed Refrigerated Microcentrifuge

RWD Life Science 高速冷凍微量離心機

 

DSC-400 Single Cell Suspension Dissociator

RWD Life Science 單細胞懸浮液製備儀

 

UV/Vis Spectrophotometer

Peak Instruments 桌上型全類別分光光度計

 

pH Meter (Touch Screen)

Peak Instruments 酸度指示儀

 

EVE PLUS Automatic Cell Counter

NanoEntek 自動細胞計數儀

 

ADAM Automated Fluorescence Cell Counter

NanoEntek 自動螢光細胞計數儀

 

C-Chip Disposable Hemocytometer

NanoEntek 一次性血細胞計數器

 

  • 台灣諾曼達科技為TSEV台灣胞外體學會指定合作夥伴, 公司具有國際權威認證的完整平台和最專業的相關知識, 在Exosome/Extracellular vesicles(外泌體/胞外體)之相關研究、製造、品管等方面皆發表有多篇著名期刊, 已在各單位舉辦超過30場外泌體實驗論壇與講座, 如有相關需求歡迎聯絡洽詢

    2014年, 國際細胞外囊泡協會 (ISEV) 基於現有的細胞外囊泡研究論述而完成了關於"細胞外囊泡及其功能定義的最低實驗要求"
    2018年, 基於不斷更新及改良的現況, ISEV 又更新並發表了 Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018)
    目前, 我們和ISEV與TSEV正依照全球相關的發展並為最新的規範提供更新意見

    做為在 EVs 領域的指定合作單位, 我們替您解析了 MISEV的內容如下:

    • 命名法

    胞外體(Extracellular Vesicles, EVs)指的是經細胞釋放而具有脂質雙分子層的顆粒, 不能複製即不包含具有功能的核心
    而外泌體(Exosomes)和微囊泡(Microvesicles)都是EVs的亞分類, 目前並沒有單一技術可完全證明所屬是哪一種, 這代表我們需要建立一個完整的驗證模式, 比如依據EVs的物理特性、生化成分、處理條件、細胞起源或是依自有的發現法命名, 如果無法依照 MISEV2018 的方法命名, 我們的建議是用微粒(Extracellualr Particles, EP)取代
    可是外泌體(Exosomes)的說法實在很吸引人, 相較下EVs的稱呼似乎沒這麼好用, 我們可以建議您針對計劃書、專業性期刊或是囊泡相關的期刊的說法, 歡迎進一步聯絡我們

    • 樣品的前處理

    包含細胞條件培養液、生物體液和組織等類型
    如何去除細胞條件培養液中FBS的EVs -
    1. 配置好的培養液(或 20% FBS 培養液), 以 100,000g/18 hrs 離心
    2. 配置好的培養液(或 20% FBS 培養液), 以 200,000g/1 hr 離心
    3. 使用切向流過濾或是超濾法 (100Kd)
    以上的建議還是有補充的注意事項而不一定都可接受, 歡迎進一步聯絡我們

    • 樣品的儲存

    目前已知的保存條件都還可接受並沒有通用的共識形成, 雖然不會影響顆粒濃度但會有粒徑分佈的變化(聚集), 在功能研究的影響不大

    • 提取方法的選擇和純度評估

    依 MISEV2018 的說法, 提取的方法可分為:
    1. 高回收, 低純度 : 主要是目前市面上各種以 PEG 為主的沉澱試劑盒 (Kit)、低分子量截流的超濾、UC 超速離心法等
    2. 適中回收, 適中純度 : 包含 SEC 尺寸排阻色譜法、高分子量截流的超濾、差速離心法、切向流過濾、親合層析法
    3. 低回收, 高純度 : 結合以上的兩種方式, 例如 UC + SEC, 密度梯度離心或免疫親和捕獲
    4. 高回收, 高純度 : 目前還沒有已被承認的方式
    那麼要如何選擇合適的提取方法呢, 主要還是依照您的實驗目標和樣品種類來考量, 歡迎進一步聯絡我們

    • 細胞外囊泡標記物的表徵策略

    依 MISEV2018 的說法, 要有兩個陽性蛋白和一個陰性蛋白標記物, 我們的建議是先做跨膜蛋白 Tetraspanins(主要是 CD63, CD8, CD81, CD82)再做膜內標記(主要是 Allx, Tsg101)
    在 MISEV2018 Table 3. 內有基於蛋白質含量的 EV 表徵描述 - 
    1. 與質膜和/或內體有關的跨膜或GPI錨定蛋白
    2. EVs 中保留的胞漿蛋白
    3. 非 EVs 共分離結構的主要組成部分
    4. 除 PM/內體外與其他細胞內區室相關的跨膜、脂質結合和可溶性蛋白
    5. EVs 保留的分泌蛋白
    第4點和第5點一般為有特異來源時才考慮, 歡迎進一步聯絡我們

    對於單一囊泡的表徵, 需要使用兩種不同但互補的方法:
    1. 例如 AFM 的 SPM 和高分辨率的顯微鏡, 注意要同時提供專一的圖像和廣泛的圖像
    2. 利用顆粒分析技術, 例如 TRPS、NTA、FC 等

    • EVs 的定量和樣品歸一化

    對顆粒濃度(數目): TRPS、NTA、FACS、AFM
    對蛋白定量: Bradford / BCA(總蛋白)、ELISA(特定蛋白)
    對脂質或RNA總量: 目前尚無已成熟的策略, 仍在確定中
    對於歸一化, 目前EVs研究中還沒有公定的內參, 但文獻內有使用外參的說法, 歡迎進一步聯絡我們

    • 確認特定分子與EVs的拓樸結構

    主要是確定所屬分子是在囊泡上或是囊泡內, 抑或是在提取時共沉澱形成的; 注意小心的設置對照組, 歡迎進一步聯絡我們
    例如:
    1. 未經過任何處理的樣品
    2. 只用降解酶處理的樣品
    3. 使用降解酶和洗滌劑處理
    4. 只用洗滌劑處理

    • 證明EVs及其內容物與功能的關聯

    法1: 以密度梯度提取EVs, 在功能研究中分別測定每個梯度的活性表現
    法2: 以SEC管柱提取EVs, 在功能研究中分別測定每個餾分的活性表現
    法3: 比較完整的EVs和經洗滌劑處理的活性, 但此法會有些技術的侷限性, 歡迎進一步聯絡我們
    法4: 以過量的免疫親和捕獲以去除實驗內的EVs, 檢測此和對照組的功能是否有對應現象
    總之, 原理即是去除EVs中的特定分子, 確認功能研究中的EVs是否不再具有對應現象, 也有使用電轉去除法(Electroporation)

    以上內容即非經許可請勿任意複製轉發分享, 如有任何建議或詢問, 歡迎和我們聯繫

認識胞外體(外泌體)

論胞外體(外泌體)與Zeta potential表面電位重要性

解析權威期刊JEV對於多重粒徑分佈的外泌體樣品的各種粒徑分析技術比較

阿茲海默症於胞外體的相關證明