外泌體尺寸排阻色譜後濃縮試劑盒 qEV Concentration Kit
使用Affinity親合吸引力取代離心過濾濃縮管, 標準化+高效率的簡單步驟完成qEV管柱分離後PCV(純化收集體積)濃縮以進行下游分析測定
- All-in-One, 內含5 mL Nanotrap® Particle溶液
- Made by Ceres Nanosciences, 品質可靠有保障
- 取代離心濃縮管, 不需考慮離心速度/時間設定和外泌體粒子的損耗
- 適用的下游蛋白組學和RNA定序分析包含: Western blot(西方墨點法), Mass(質譜), RT-qPCR
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眾所周知, 關於 Exosome/Extracellular Vesicles (EVs) 外泌體的分離提取步驟非常重要, 也是影響其純度的關鍵要素; 而使用 qEV (SEC) 的分離過程已被證實能快速、可靠而標準化的得到高純度外泌體粒子, 但要注意的是, 在進行下游分析前, 需要將所得的PCV(純化收集體積)進行"體積濃縮", 使其濃度達到下游Wersten Blot, Mass, q-PCR實驗測定的要求。
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| qEV 類型 | 樣品輸入體積 | PCV 體積 (mL) |
| qEVsingle | 150 µL | 0.68-0.82 |
| qEVoriginal | 500 µL | 1.6-2.8 |
| qEV1 | 1 mL | 2.8-4.2 |
| qEV2 | 2 mL | 6.0-8.0 |
| qEV10 | 10 mL | 10-20 |
取代以往使用的離心過濾濃縮管(Ultrafiltration Devices Concentrator)?
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關於qEV (SEC) 尺寸排阻色譜分離之後的濃縮方式, 一般會先想到使用超濾膜的離心過濾濃縮管(Concentrator)進行反覆離心來進行, 然而其缺點在於這並不是專為外泌體粒子大小為出發點所考量的設計, 可能會出現濃縮倍率的受限和外泌體沾附在過濾膜上所造成的損耗, 在離心的過程中也可能危及到外泌體的完整性, 以上風險都會導致外泌體和其所帶"貨物"的損失, 進而影響了後續的組學分析(蛋白或核酸)效果。 qEV Concentration Kit (外泌體尺寸排阻色譜後濃縮試劑盒) 是一個 All-in-One 系統, 可將 qEV (SEC) 後的 PCV (純化收集體積, 範圍: 600 μL~20 mL) 輕易的濃縮成 EV pellet (外泌體濃縮小丸), 大幅減少操作人員的負擔; 不需要特殊的設備也不會使用到沉澱性的反應物或蛋白酶處理, 每次的使用量只需 50 µL - 200 µL, 有效節省時間和預算成本。 |
qEV 後濃縮試劑盒的原理
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Nanotrap® particles (NT)qEV外泌體尺寸排阻色譜後濃縮試劑盒內含有一瓶 5 mL Ceres Nanosciences Nanotrap® Extracellular Vesicle Particles, 其懸浮試劑溶液是由大約 260 nm 大小的水凝膠粒子所組成, 主要成分為 thermostable cross-linked N-isopropylacrylamide (NIPAm) polymers, 耐熱交聯 N-異丙基丙烯酰胺 (NIPAm) 聚合物, 已被各種報導所證實其可在不同溫度及pH值的條件下將相對小的目標分析物保留下來。 Nanotrap® EV Particles 的粒子表面還帶有化學親和性的"誘餌", 使其可與外泌體粒子進行特異性的結合; 如圖示。 |
特點1可輕易將 qEV (SEC) 分離後的PCV(純化收集體積)濃縮成為一個"EV pellet" |
特點2qEV (SEC) 後的PCV(純化收集體積)範圍從 600 µL到 20 mL皆可進行 |
特點3不需再考慮離心時間和轉速的調整, 直接按照流程進行就好 |
特點4完全符合下游分析: western blotting, mass spec., RNA分析的需求(接續外泌體RNA萃取試劑組, qEV RNA Extraction Kit) |
不同的親和性誘餌, 使用後的下游WB結果差異
Nanotrap® EV Particles (NT80+82) vs. 其他對於病毒的特異性誘餌 (NT86)
以腫瘤細胞上清液為例, 在 Jurket (未感染的人類 T 細胞嗜淋巴細胞病毒 1 型 HTLV-1)與 HUT102 (已感染的 HTLV-1) 細胞系中, 外泌體陽性標記 CD63, Alix 和陰性的 Actin 的 Western Blot 對照。
結果顯示 Nanotrap® EV Particles 的親和性誘餌 (NT80+82) 可與外泌體型的 EV 鍵結, 而其他對於病毒的特異性誘餌 (NT86) 則不能產生鍵結, 進而有所區別。
和離心過濾濃縮管比較, 使用後的RNA分析差異
qEV Concentration Kit vs. Amicon Concentrator
使用了 qEV2/35nm column 純化出血漿的 EVs 後, 分別使用 qEV Concentration Kit (Nanotrap) 和超濾法 (Amicon Concentrator)提取分離後進行體積濃縮, 之後將其重懸於600 µL 緩衝液中, 再使用 qEV RNA Extraction Kit 將外泌體內的RNA完整萃取出。
將萃取得到的外泌體RNA使用 SYBR 法增益其中的 mRNA 目標物, 結果顯示使用 qEV Concentration Kit 會在濃縮後定量到更多的 mRNA 目標物。
qEV後濃縮試劑盒適合的下游測定
請注意, 外泌體粒子與Nanotrap® EV Capture Particles的結合是不可逆的, 這代表著其不可用於功能測試或治療藥劑, 只能用於下游分析測定。
可進行的下游應用:
V. 組學研究(例如: 蛋白組學, RNA定序)。
V. Western blot 西方墨點法。
V. qPCR 即時螢光定量核酸擴增。
不可進行的下游應用:
X. 功能測試研究。
X. ELISA 酶聯免疫吸附試驗。
| 英文品名 | qEV Concentration Kit |
| 中文品名 | 外泌體尺寸排阻色譜後濃縮試劑盒 |
| 貨號 | RCT02 |
| 內含物 | Nanotrap particle solution*1瓶 (約5 mL) |
| 使用方式 | 依照qEV column的PCV純化收集合併體積, 每次使用量只需 50 - 200 µL |
qEV Concentration Kit 內含一瓶 5 mL 的 Nanotrap® EV Capture Particles Solution, 對照前面所使用的 qEV columns (SEC) 分離後的純化收集體積(PCV), 每次的使用量如下:
| 用來純化的 qEV (SEC) 類型 | 純化收集體積 (PCV) | 加入的 qEV Concentration Kit 體積量 |
| qEVsingle | 0.68 - 0.82 | 50 µL |
| qEVoriginal | 1.6 - 2.8 | 100 µL |
| qEV1 | 2.8 - 4.2 | |
| qEV2 | 6.0 - 8.0 | 150 µL |
| qEV10 | 10 - 20 | 200 µL |
使用步驟:
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收集qEV後的PCV後, 加入對應的 Nanotrap Solution 體積
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放在旋轉機上(rotator), 旋轉一小時(混和均勻)
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離心 16,800 x g / 10分鐘, 即可見到底部有明顯的 "EV pellet"
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小心的移除上清液, 留下 EV pellet
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此 EV pellet 即可用來進行下游實驗: Western Blot, Mass, RT-qPCR
