qEV (Magnetic) Concentration Kit ( qEV 胞外體/磁性/濃縮試劑盒 )

qEV Concentration Kit (qEV 胞外體濃縮試劑盒)

快速有效的富集純化後的胞外體(EVs)粒子、零損耗: 使用Affinity親合吸引力取代離心濃縮管 、可標準化的使用簡單的步驟完成

  • All-in-One, 內含5 mL Nanotrap® Particle溶液
  • Made by Ceres Nanosciences, 品質可靠有保障
  • 取代離心濃縮管, 不需考慮離心速度/時間設定和EVs粒子的損耗
  • 適用的下游組學分析: Western Blot(西方墨點法), Mass(質譜), qPCR(RNA組學分析)

瞭解更多:
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商品特色 qEV Concentration Kit 規格 使用方式

qEV Concentration Kit 胞外體濃縮試劑盒
眾所周知, 關於 Exosome/Extracellular Vesicles (EVs) 的純化提取步驟非常重要, 也是其影響純度的關鍵要素; 而使用 qEV columns (SEC) 的純化過程已被證實能快速、可靠而標準化的得到高純度的 EV 粒子, 但要注意的是, 在進行下游分析前, 需要將所得的 EV fractions 做合併pooled為"EV zone"後再進行"體積濃縮", 使其濃度達到下游Wersten Blot, Mass, q-PCR實驗的要求。

各qEV的純化收集體積(EV zone)
qEV 類型 樣品輸入體積 EV zone 體積 (mL)
qEVsingle 150 µL 0.68-0.82
qEVoriginal 500 µL 1.6-2.8
qEV1 1 mL 2.8-4.2
qEV2 2 mL 6.0-8.0
qEV10 10 mL 10-20

取代以往使用的離心濃縮管(Ultrafiltration Devices Concentrator)?

關於qEV純化之後的濃縮方式, 一般會先想到用超濾膜的離心濃縮管(Concentrator)進行反覆的離心來進行, 然而其缺點在於這並不是專為 EV 的粒子大小為出發點所考量的設計, 可能會出現濃縮倍率的受限和 EVs 粒子沾附在膜上所造成的損耗, 在離心的過程中也可能危及到 EV 的完整性, 以上風險都會導致 EVs 粒子和其所帶的"貨物"的損失。

qEV Concentration Kit (qEV 胞外體濃縮試劑盒) 是一個 All-in-One 系統, 可將 qEV columns (SEC) 後的 EV fractions (pooled 體積範圍: 600 μL~20 mL) 輕易的濃縮成 pellet (顆粒), 大幅減少操作人員的負擔; 不需要特殊的設備, 不會使用沉澱性的反應物或蛋白酶處理, 每次試劑的使用量只需 50 µL - 200 µL, 有效節省時間與預算成本。

 

qEV Concentration Kit (qEV 胞外體濃縮試劑盒) 的原理

qEV concentration kit

Nanotrap® particles (NT)

qEV Concentration Kit (qEV 胞外體濃縮試劑盒) 內含一瓶 5 mL Ceres Nanosciences Nanotrap® Extracellular Vesicle Particles, 是由大約 260 nm 大小的水凝膠粒子所組成的懸浮試劑溶液, 主要成分為 thermostable cross-linked N-isopropylacrylamide (NIPAm) polymers, 耐熱交聯 N-異丙基丙烯酰胺 (NIPAm) 聚合物, 已被各種報導所證實其可在不同的溫度及pH值的條件下將較小的目標分析物保留下來。

Nanotrap® EV Particles 的顆粒表面還帶有化學親和性的"誘餌", 使其可與 EV 粒子進行特異性的結合; 如圖示。

 
 

特點1

輕易的將qEV columns純化後的EVs粒子做富集成為一個"pellet"

特點2

qEV columns後的PCV(純化收集體積)範圍從 600 µL到 20 mL皆可進行

特點3

不需再考慮離心時間和轉速的調整, 直接按照流程進行就好

特點4

完全符合下游分析: western blotting, mass spec., RNA分析的需求(接續qEV RNA Extraction Kit)

 

不同的親和性誘餌, 使用後的下游WB的結果差異

Nanotrap® EV Particles (NT80+82) vs. 其他對於病毒的特異性誘餌 (NT86) 

qEV concentration kit

以腫瘤細胞上清液為例, 在 Jurket (未感染的人類 T 細胞嗜淋巴細胞病毒 1 型 HTLV-1)與 HUT102 (已感染 HTLV-1) 細胞系中, 外泌體陽性標記 CD63, Alix 和陰性的 Actin 的 Western Blot 對照。

結果顯示 Nanotrap® EV Particles 的親和性誘餌 (NT80) 可與外泌體型的 EV 鍵結, 而其他對於病毒的特異性誘餌 (NT86) 則不能產生鍵結。

和離心濃縮管比較, 使用後的RNA分析差異

qEV Concentration Kit vs. Amicon Concentrator

使用了 qEV2/35nm column 純化出血漿的 EVs 後, 分別使用 qEV Concentration Kit (Nanotrap) 和超濾法 (Amicon Concentrator)進行EV zone後濃縮, 之後將其重懸於600 µL 緩衝液中, 再使用 qEV RNA Extraction Kit 將EV內的RNA完整的萃取出。

將萃取得到的EV-RNA, 使用 SYBR 法增益其中的 mRNA 目標物, 結果顯示使用 qEV Concentration Kit 會在濃縮後定量到更多的 mRNA 目標物。



 

IZON qEV Concentration Kit (胞外體濃縮試劑盒)

英文品名 IZON qEV Concentration Kit
中文品名 qEV胞外體濃縮試劑盒
貨號 RCT02
內含物 Nanotrap particle solution*1瓶 (約5 mL)
使用方式 依照qEV column的EV fractions合併體積, 每次使用量只需 50-200 µL

qEV Concentration Kit 內含一瓶 5 mL 的 Nanotrap® EV Capture Particles Solution, 對照前面所使用的 qEV columns 純化後的 EV zone (純化收集體積, PCV), 每次的使用量如下:

用來純化的 qEV columns 純化收集體積 (PCV) 加入的 qEV Concentration Kit 體積量
qEVsingle 0.68 - 0.82 50 µL
qEVoriginal 1.6 - 2.8 100 µL
qEV1 2.8 - 4.2
qEV2 6.0 - 8.0 150 µL
qEV10 10 - 20 200 µL

使用步驟:

1. 收集qEV後的PCV後, 加入對應的 Nanotrap Solution 體積
2. 放在旋轉機上(rotator), 旋轉一小時(混和)
3. 離心 16,800 x g / 10分鐘, 即可見到底部有明顯的 "EV pellet"
4. 小心的移除上清液, 留下 EV pellet
5. 此 EV pellet 即可用來進行下游實驗: Western Blot, Mass, RT-qPCR