韓國MFDS細胞外囊泡(EV)治療用產品之指南詳細解析

此份文件是對韓國食品藥品安全部(MFDS)於2024年9月發布的《細胞外囊泡治療用產品之品質、非臨床和臨床評估指南》的全面解析。該指南為開發EV治療用產品提供了詳細的監管考量和科學建議。

1. 文件概覽

• 文件標題: Guideline on Quality, Non-clinical and Clinical Assessment of Extracellular Vesicles Therapy Products (Guidance for Industry)

• 發佈機構: 韓國食品藥品安全部 (MFDS) - 國家食品藥品安全評估研究所 (NIFDS)

• 最新版本: Guidance-0917-03 (英文版), 於2024年9月24日發佈

• 法律地位: 本指南為建議性質，不具有法律約束力，旨在以更平實的語言解釋現行法規和MFDS的立場。

2. 指南核心架構

該指南主要分為三大核心部分，涵蓋了EV治療用產品從開發到上市所需考慮的關鍵環節：品質考量(Quality Considerations)、非臨床考量(Nonclinical Considerations)和臨床考量(Clinical Considerations)

3. 適用範圍 (Scope)

指南明確定義了其監管的對象和邊界。

適用對象	不適用對象
✅ 使用從 人類、動物或微生物 細胞分泌的EVs製造的治療產品。	❌ 未經分離和純化的細胞懸浮液或細胞裂解物。
✅ 經過一系列分離和純化步驟的EV藥品。	❌ 通過物理方法破壞細胞製成的「EV模擬物」(EV mimetics)。
✅ 使用轉基因細胞生產的EVs。	❌ 植物細胞來源的EVs (可能需要額外考量)。

核心定義: EV治療用的產品被定義為使用活細胞通過一系列分離和純化步驟製造的藥品。

4. 品質考量 (Quality Considerations) - 最關鍵部分

這是指南中篇幅最長、要求最詳細的部分，涵蓋了從起始物料到最終產品放行的所有質量控制環節。

4.1 起始物料的表徵 (Characterization of Starting Materials)

源頭管理是確保產品質量的第一步。

• 細胞來源: 必須詳細記錄細胞或組織的來源，以及捐贈者的資格標準、健康狀況和病史。

• 細胞類型: 可以使用自體/異體人類細胞、間充質幹細胞(MSCs)、誘導性多能幹細胞(iPSCs)、胚胎幹細胞(ESCs)等。其適用性需要預先評估。

• 細胞庫 (Cell Bank): 必須建立和維護一個穩定的工作細胞庫。

• 永生化細胞株: 如果使用永生化細胞株或iPSCs/ESCs，需要進行嚴格的基因型和表型穩定性測試，並評估其 致瘤性 (Tumorigenicity) 的潛在風險。

4.2 製造、分離/純化與表徵

4.2.1 製造過程 (Manufacturing)

• 培養條件 -- 必須標準化並證明批次間的可重複性。影響產量和品質的因素包括: 細胞接種密度、收穫時的細胞匯合度 (confluency)、細胞活力、傳代方法與代數、倍增時間、培養基成分/溫度/氧氣和二氧化碳濃度

• 血清使用: 強烈建議 避免使用動物源性物質，如胎牛血清(FBS)。如果必須使用FBS，應證明其不含牛源病毒，並考慮其可能引入牛源EVs，從而干擾產品效果; 鼓勵使用無血清培養基或化學成分確定的培養基

4.2.2 分離與純化 (Isolation and Purification)

• 常用方法: 超速離心、超濾、沉澱法、色譜法等，或組合使用。

• 方法學要求: 分離方法必須標準化，以確保可重複性、純度和完整性。需詳細描述所用方法，並證明其可重複性。

• 雜質控制: 必須建立檢測「過程相關雜質」(process-related impurities)的標準，並考慮純化前後雜質水平的比較。

4.3 特性表徵 (Characterization)

這是確保EV產品質量和一致性的核心。

鑑定類別	建議方法與要求
組成分析	- 目的: 證明分離和純化的EVs在蛋白質、RNA和脂質組成上具有一致性。 - 方法: 建議使用LC-MS/MS等先進技術進行定量分析。 - 要求: 與已知的EV數據庫進行比較。
標記物表徵	- 目的: 確認EV身份。 - 方法: 建議進行多重分析。 - 要求: 至少包含 3種 EV特異性蛋白標記物 (如四跨膜蛋白家族的CD9, CD63, CD81；或晚期內體形成相關的Tsg101, Alix)，同時應包含 非EV相關蛋白 作為陰性對照。
結構與形態	- 目的: 研究脂質雙層結構、粒徑分佈和EV比例。 - 方法: 使用高分辨率成像方法，如 冷凍電子顯微鏡 (Cryo-EM) 和單顆粒分析技術。
生物學活性	- 目的: 評估EVs的藥理作用。 - 方法: 建立多方面的 效價測定 (Potency Assays)。 - 要求: 活性測量應基於標準單位 (如顆粒數或蛋白質含量) 進行。應設立陰性對照組 (如MOCK-EVs) 以排除培養基中水溶性因子的干擾。

4.4 最終治療產品的品質控制 (Quality Controls of EV Therapy Products)

這是產品放行前必須執行的檢測項目。

檢測項目	描述與要求
外觀 (Appearance)	宏觀檢查產品的澄清度、顏色、包裝等。
EV計數 (EV Counts)	- 目的: 定量活性成分。 - 方法: NTA、RPS、流式細胞術。
EV粒徑 (Size of EVs)	- 目的: 描述粒徑分佈。 - 方法: DLS、NTA、RPS、流式細胞術。
支原體 (Mycoplasma)	- 要求: 最終產品不得含有支原體。建議在EV分離純化前的最後一次細胞培養結束時取樣檢測。
外源性病毒 (Adventitious Virus)	- 要求: 必須證明產品中無病毒污染。建議在EV分離純化前的最後一次細胞培養結束時取樣檢測。
無菌性 (Sterility)	- 要求: 最終產品不得被微生物(細菌或真菌)污染。應根據韓國藥典進行檢測。
內毒素 (Endotoxin)	- 要求: 必須確認在製造過程中沒有內毒素污染。應根據韓國藥典選擇凝膠法、比濁法或顯色法進行檢測。
身份鑑別 (Identity)	- 目的: 確認產品含有預期的活性成分(EVs)。 - 方法: 通過形態學、免疫學和生物學分析來鑑定EV標記物。
純度 (Purity)	- 要求: 必須控制兩類雜質：  1. 非EV相關的細胞內蛋白 (如核蛋白、線粒體蛋白)。  2. 過程相關雜質 (如血清、白蛋白、抗生素)。
效價 (Potency)	- 目的: 測量產品的生物學活性。 - 方法: 應建立與其作用機制相關的定量生物學測定方法。

4.5 穩定性 (Stability)

• 目的: 確定產品的保質期和儲存條件。

• 要求: 必須進行穩定性研究，以評估產品在不同儲存條件下的質量變化，包括其物理、化學、生物學特性和微生物學純度。

5. 非臨床考量 (Nonclinical Considerations)

在進入人體試驗前，必須進行充分的動物研究。

• 藥理作用數據 (Pharmacological Actions): 應提供體外(in vitro)和體內(in vivo)的概念驗證(Proof-of-Concept)數據、應研究EVs的作用機制(MOA)、 應進行生物分佈(Biodistribution)研究，以了解EVs在體內的去向。

• 毒性數據 (Toxicity Data): 應進行單次和重複劑量的毒性研究、應評估 免疫原性 (Immunogenicity) 和免疫毒性、如果起始細胞具有致瘤性，應進行致瘤性研究、應根據ICH S6(R1)指南進行研究設計。

6. 臨床考量 (Clinical Considerations)

指南對臨床試驗的要求相對簡潔，強調應遵循通用原則。

• 首次人體試驗 (First-in-human): 應基於充分的品質和非臨床數據來確定起始劑量、給藥方案和劑量遞增計劃。

• 劑量單位: 建議使用 EV顆粒總數 或 總蛋白量 作為劑量單位。

• 風險管理: 應制定全面的風險管理計劃，以監測和應對潛在的不良事件。

7. 結論與關鍵要點

• 監管定位: 韓國MFDS將EVs視為 生物製品 (Biological Products)，而非細胞治療產品，因為它們不含活細胞。

• 品質為王: 指南的核心在於 全面的品質控制。從起始物料到最終產品放行，每一步都有嚴格的建議和要求。

• 表徵是基礎: 強調使用多種先進技術對EVs進行全面的物理化學和生物學表徵，特別是 身份、純度、計數、粒徑和效價。

• 安全優先: 強調對病毒、支原體、內毒素和致瘤性等安全風險的嚴格控制。

• 方法學驗證: 所有用於品質控制的分析方法都必須經過充分的驗證，以確保其準確性和可靠性。

• 避免動物源: 強烈建議在生產過程中避免使用動物源性材料，以降低引入外來病原體和雜質的風險。

綜上所述, 這份指南為全球EV治療產品的開發者提供了一個清晰、科學且嚴謹的監管框架參考。
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