qEV Column (SEC) 胞外體提取管柱

符合ISO13485:2016品質規範 | 樣品直接自然滴落 | 15分鐘內完成 | 最純淨無損的方式 | 管柱洗脫後可重複使用

qEV Column (Gen 2) 胞外體提取管柱 (全新發售 Gen 2 型號已發佈) [原廠YT介紹和示範短片請見頁底]

exosome isolation

近年來, 胞外體/細胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)的研究越來越引起相關生物學者的關注, 因為它們可擔任細胞間訊息傳導的角色: 包含免疫調節、細胞的活化與凋亡誘導以及在疾病狀態下的改變, EVs 的內容物有外泌體(Exosome, 胞泌體)、微囊泡(Microvesicles)、外吐小體、胞外小體等。
因此, 如何提取和分析高含量與高純度的 EVs 就變成一個必要的過程(Exosomes/EVs isolation)。

還在用傳統的純化提取方法嗎?
傳統一般會使用的高速離心法(UC)或沉澱原理的試劑組(Precipitation Reagent Kits)常會遇到一些問題, 比如高速離心過程很花時間, 在 20,000g 的作用力下常會破壞囊泡或使囊泡團聚而影響後續的分析, 而使用密度梯度離心法 (Density gradient centrifugation, DGC) 會需要很昂貴的設備也很費時; 目前市面上以沉澱原理的試劑組通常是基於PEG高分子聚合物而對沉積胞外體有選擇性, 但相關文獻早已指出這些試劑的成分很大可能會引起蛋白質、脂蛋白和其他生物成分的共沉澱現象出現。

現在就選擇qEV column吧
IZON Science的 Gen 2 qEV column 胞外體提取管柱, 製造過程符合ISO13485認證, 可得到非常純淨的胞外體(外泌體)粒子, 純度可高達約1.0E+10個粒子/每µg雜蛋白 (以10mL人類血漿樣品量為例, 相當於1.0E+13個粒子/每ug雜蛋白), 相較之前舊版的 Legacy qEV column 具有更為優化的表現qEV column Gen2
 

SEC 尺寸排阻色譜法

MISEV指南: 相對容易的使用方式, 可乾淨有效的分離EVs和Protein, 使用自動系統可減少人為之間的誤差

exosome isolation

qEV Columns 胞外體提取管柱是基於 SEC (Size Exclusion Chromatography) 尺寸排阻色譜法, 又名凝膠排阻法(Gel Filtration) - 可提供快速簡單而精準有效的胞外體提取方式, 以"自然滴落"的方式在15分鐘內即可提取完整的胞外體純樣, 大粒徑的粒子會先流出, 相對的小粒徑(35nm或70nm以下)的粒子會進入到孔洞內而較晚流出, 比採用傳統的高速離心 (UC) 或沉澱試劑 (Precipitation Reagent Kits) 的方式更加能純淨、簡單、快速、精確而無損的提取胞外體, 更適合後續的下游分析例如Tunable Resistive Pulse Sensing, Electron Microscopy, Proteome or Transcriptome Analysis, 搭配 qEV Concentration KitqEV RNA Extraction Kit 更是串聯一體化的流程
qEV Columns 依照原始樣品體積的不同已經有 6 個型號 (150µL - 100mL), 每個型號都有35奈米和70奈米兩種孔徑可以選擇, 可完全覆蓋您的原始樣品類型, 使用 PBS 或是其他生理緩衝液洗脫管柱後可重複使用。
現在, qEV 還可以選擇全球第一的自動提取裝置 (AFC-V2, Automatic Fraction Collector)
exosome isolation

各種適用的生物樣品

血清、血漿、唾液、尿液、乳液細胞培養上清液(預濃縮)、CSF腦脊髓液、生物反應器等各種樣品來源

qEV Gen 2 Column (SEC) 可移除>97%的污染可溶性蛋白

舉例: 使用 qEVoriginal Gen 2 column 滴入0.5 mL 血漿的典型洗脫曲線

exosome isolation

全球唯一, 管柱生產過程品質可靠證明

符合 ISO 13485:2016 規範

exosome isolation

qEV is now the Gold Standard for exosome/EV isolation

qEV Columns Gen 2 規格

exosome isolation

1. 管柱類型(sample loading volume): qEVsingle(150 µL) / qEVoriginal(500 µL) / qEV1(1 mL) / qEV2(2 mL) / qEV10(10 mL) / qEV100(100mL)
2. 操作溫度 : 18-24 ºC
3. 分離的粒徑孔洞 : 35 nm or 70 nm nominal
4. Buffer種類 : All qEV columns come equilibrated in PBS buffer
5. 可通過的最大粒子粒徑 : 1 µm
6. 頂部與底部的過濾器尺寸 : 20 µm
7. 可穩定運作的pH值範圍 : 3-13
8. 可穩定流洗清潔的pH值範圍 : 2-14
9. 正確保存下的使用週期 : 12 months

※ 全新改良型的 Agarose resin 填充的 "Gen 2" 型號的columns 已開始發售, 可大幅提升回收率與純度

如何選擇您的 qEV Columns 胞外體提取管柱?

第一步 : 依原始樣品的體積 (Sample Loading) 選擇適合的型號 (如原樣為細胞上清液建議先濃縮體積以提高粒子濃度)-

1. qEVsingle - Gen 2 (新發售)
最大樣品體積(Sample Loading): 100-150 µL (20支/盒, 單次使用); 如為細胞上清液原樣, 可由<15 mL 以下的體積濃縮(100 kDa 超濾離心管concentrator)
2. qEVoriginal - Gen 2 (新發售)
最大樣品體積(Sample Loading): 500 µL (5支/盒, 可重複使用)
如為細胞上清液原樣, 可由15-100 mL的體積濃縮(100 kDa 超濾離心管concentrator)
3. qEV1 - Gen 2 (新發售)
最大樣品體積(Sample Loading): 1 mL (5支/盒, 可重複使用); 
如為細胞上清液原樣, 可由50-200 mL的體積濃縮(100 kDa 超濾離心管  or TFF concentrator)
4. qEV2 - Legacy
最大樣品體積(Sample Loading): 2 mL (2支/盒, 可重複使用)
; 如為細胞上清液原樣, 可由100-300 mL的體積濃縮(100 kDa TFF concentrator)
5. qEV10 - Gen 2 (新發售)
最大樣品體積(Sample Loading): 10 mL (1支/盒, 可重複使用)
; 如為細胞上清液原樣, 可由300-1000 mL的體積濃縮(100 kDa TFF concentrator)
6. qEV100 - Gen 2 (新發售)
最大樣品體積(Sample Loading): 100 mL (1支/盒, 可重複使用)
; 如為細胞上清液原樣, 可由4-5 L的體積濃縮(100 kDa TFF concentrator)

qEVsingle: 150µL (20支/盒)

qEV

qEVoriginal: 500µL (5支/盒)

qEV

qEV1: 1mL (5支/盒)

qEV

qEV2: 2mL (2支/盒)

qEV

qEV10: 10mL (1支/盒)

qEV

qEV100: 100mL (1支/盒)

qEV
 

第二步 : 選擇適合的孔徑 (35nm or 70nm)

回收的粒徑範圍

qEV-35nm: 35-350nm
qEV-70nm: 70-1000nm

回收的集中區域

qEV-35nm: EV<110nm
qEV-70nm: EV>110nm

脂蛋白覆蓋率(採用血漿-血液樣品時)

qEV-35nm>qEV-70nm

想要EVs粒子收集的濃度?EVs粒子收集的回收率?還是EVs粒子的最大純度?, 由用戶決定的自訂義操作

qEV10/35nm Gen 2 column使用10 mL人類血漿(human plasma)樣品為例, 滴落的流洗曲線如圖; 雜蛋白粒子會比胞外體粒子(EVs, 或相似的60 nm大小的粒子)流洗的更晚出現; 粒子濃度是以TRPS原理的Exoid粒徑分析儀得出, 蛋白水準由BCA測定得出。
大部分的EVs粒子會在Buffer Volume後的20 mL中出現, 就是所謂的EV zone; 如果要求的是更好的"純度", 那就只要收集前15 mL的滴落體積就好; 用戶可以收集更多的滴落體積以達成"最大回收率", 或是收集少一些的體積以達到"最大純度"。

以血漿為例的雜蛋白會在後面的體積中流洗出來, 大約是在Buffer Volume後的25-70 mL內出現; 所以在20 mL之後就要小心, 除了囊泡之外會有更高的蛋白汙染物出現, 進而影響之後的下游分析實驗(純度越低)
qEV10 Gen 2 column的不同流洗的建議參數表, 選擇適合您的純化收集體積吧(PCV, Purified Collection Volume); 以人類血漿樣品為例(human plasma), 其他樣品類型可能會有略為不同的流洗曲線。
要求EVs粒子的濃度-拉高Buffer Volume, 收集之後的3個fractions為EV zone
要求EVs粒子的回收率-維持Buffer Volume, 收集之後的7個fractions為EV zone
要求EVs粒子的最大純度-維持Buffer Volume, 收集之後的3個fractions為EV zone
AFC-V2自動提取機的預設值-維持Buffer Volume, 收集之後的4個fractions為EV zone

如使用不同型號的qEV column請參閱完整版的用戶使用手冊內容或詢問我們的專員

Q&A

1. 使用 qEV Columns 提取 Exosome/EVs 時需要做什麼前置作業嗎?
Ans: 採用SEC尺寸排阻色譜法的qEV Columns在使用前只需注意要先將樣品進行兩次步進的低速離心 - 1,500g/10mins, 將上清液移至新Eppendroff後再使用 10,000g/10mins 取上清, 以上的目的是要去除樣品內的細胞碎屑或其他的大粒子, 之後即可放入 qEV Columns 以自然滴落的方式提取 Exosome/EVs 的組分(fractions)

2. 已經使用過的qEV Columns要怎麼封存/保存呢? 所使用的Buffer有什麼注意事項呢?
Ans: 新的qEV Columns有加入0.05% w/v sodium azide做抑菌劑 (with PBS)所以可於室溫下保存/運輸; 而已用過並elution後的qEV column, 封存方式有三種:
1. 以0.05% w/v sodium azide(with PBS)封存, 即可在室溫保存; 下次使用時一樣要先做"equilibrate"平衡的動作, 以2倍column體積的Buffer流洗管柱。
2. 使用20% ethanol封存, 可在室溫保存; 因PBS如果直接接觸乙醇會形成結晶而堵塞管柱, 所以要先以DI water流洗2xcolumn volume後再放入乙醇, 下次使用前一樣要先用DI water流洗後再放入PBS buffer做平衡。
3. 如只加入PBS封存, 則建議放4-8度冷藏下保存(不可冷凍); 但一定需要注意PBS要經過degas & filtered, 避免下次取出在室溫下時因為溫差而析出小氣泡於管柱內影響使用。
請注意, 實驗過程中所用到的PBS buffer都應經過0.22um filtered & Degas除氣(可使用負壓泵接錐形瓶形成管路的負壓系統抽氣, 或退其次以超音波震盪15分鐘以上), 以避免在column的resin中析出氣泡

3. 我的原樣體積很大(ex: 細胞上清液), 該使用何種 qEV Columns 呢?
Ans: 現在qEV Columns的型號最大為qEV100(sample loading 100 mL), 如果要使用 AFC-V2 自動提取機的最大型號則為qEV10(10 mL); 關於細胞上清液(Cell Culture Media)的原始體積量範圍已可達4-5L, 只需先使用100 kDa濃縮管(或TFF)預先縮小體積, 相關流程請參閱實驗應用專區-如何從細胞上清液内提取高純度的細胞外囊泡

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